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    一種可改善啤酒起泡性能的啤酒酵母工程菌及制備方法.PDF 24頁

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    (19)中華人民共和國國家知識產權局 *CN101955891A* (12)發明專利申請 (10)申請公布號 CN 101955891 A (43)申請公布 日 2011.01.26 (21)申請號 201010257936.4 C12C 11/02 (2006.01) C12R 1/865 (2006.01) (22)申請 日 2010.08.20 (83)生物保藏信息 CGMCC No.3010 2009.04.14 (71)申請人 浙江大學 地址 310027 浙江省杭州市西湖區浙大路 38 號 (72)發明人 何國慶 陳啟和 張強 阮暉 (74)專利代理機構 杭州天勤知識產權代理有限 公司 33224 代理人 胡紅娟 (51) Int.C l. C12N 1/19 (2006.01) 權利要求書 1 頁 說明書 10 頁 序列表 7 頁 C12N 15/09 (2006.01) 附圖 5 頁 (54) 發明名稱 一種可改善啤酒起泡性能的啤酒酵母工程菌 及制備方法 (57) 摘要 本發明提供了一種啤酒酵母工程菌,出發菌 株為釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae),該 釀酒酵母染色體上的PEP4 基因部分或全部被重 組序列替換而破環,所述的重組序列包括 β- 葡 聚糖酶基因表達單元。本發明啤酒酵母工程菌通 過將外源 β- 葡聚糖酶基因表達單元通過同源重 組技術將工業釀酒酵母染色體上PEP4 基因的部 分序列或全部序列替換,蛋白酶A 活性顯著降低, 而能穩定表達 β- 葡聚糖酶。該構建的啤酒酵母 工程菌不僅遺傳穩定性良好,而且具有優于出發 菌株的啤酒釀造品質,啤酒泡沫穩定性和 β- 葡 聚糖降解率提高,啤酒過濾速度改善,而且生理性 A 能和生化特性并無明顯差異。 1 9 8 5 5 9 1 0 1 N C CN 101955891 A 權 利 要 求 書 1/1 頁 1. 一種啤酒酵母工程菌,出發菌株為釀酒酵母 (Saccharomycescerevisiae),該釀酒 酵母染色體上的PEP4 基因部分或全部被重組序列替換而破環,其特征在于:所述的重組序 列包括 β- 葡聚糖酶基因表達單元。 2. 根據權利要求1 所述的啤酒酵母工程菌,其特征在于:所述的 β- 葡聚糖酶基因表 達單元由依次連接的3- 磷酸甘油酸激酶基因啟動子序列、信息素 α- 因子分泌信號序列、 β- 葡聚糖酶基因序列和乙醇脫氫酶基因終止子序列組成。 3. 根據權利要求1 所述的啤酒酵母工程菌,其特征在于:所述的重組序列包括卡拉霉 素抗性基因序列。 4. 根據權利要求1所述的啤酒酵母工程菌,其特征在于:所述的PEP4 基因被替換的部 分為第686 個堿基到第1987 個堿基的序列。 5.根據權利要求1所述的啤酒酵母工程菌,其特征在于:命名為釀酒酵母PRAD,保藏號 為CGMCC No.3010。 6. 權利要求1 ~5 任一所述的啤酒酵母工程菌的構建方法,包括以下步驟 :在重組序 列兩端連接同源臂序列,轉化到感受態出發菌株中進行同源重組得到。 7. 根據權利要求6 所述的構建方法,其特征在于:連接重組序列上游的同源臂序列如 SEQ ID NO.1 所示。 8. 根據權利要求6 所述的構建方法,其特征在于:連接重組序列下游的同源臂序列如 SEQ I

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